ማሰሪያን ለመለወጥ ምን ያህል ያስወጣል?

2024 ደራሲ ደራሲ: Miles Stephen | [email protected]. ለመጨረሻ ጊዜ የተሻሻለው: 2023-12-15 23:33

ለውጥ . ከ1-5 µl መካከል ይጨምሩ ligation ድብልቅ ወደ ብቃት ሴሎች ለ ለውጥ . የተራዘመ ligation ከ PEG ጋር ወደ ውስጥ መውደቅ ያስከትላል ለውጥ ውጤታማነት (ፈጣን) ልገሳ ኪት)። ኤሌክትሮፖሬሽን ለትልቅ ግንባታዎች (> 10, 000 bp) ይመከራል.

ከዚህ ውስጥ፣ ለትራንስፎርሜሽን ምን ያህል የሊጌሽን ምርት እፈልጋለሁ?

ለውጥ . ከ1-5 µl መካከል ይጨምሩ ligation ድብልቅ ወደ ብቃት ሴሎች ለ ለውጥ . የተራዘመ ligation ከ PEG ጋር ወደ ውስጥ መውደቅ ያስከትላል ለውጥ ውጤታማነት (ፈጣን ልገሳ ኪት)። ለትላልቅ ግንባታዎች (> 10, 000 bp) ኤሌክትሮፖሬሽን ይመከራል.

በመቀጠል ጥያቄው ሊጋሽን እና ትራንስፎርሜሽን ምንድን ነው? በተለመደው የክሎኒንግ ሙከራ፣ ተመራማሪዎች በመጀመሪያ ዲኤንኤ፣ ለምሳሌ ጂን፣ ፕላስሚድ በሚባል ክብ የዲ ኤን ኤ ቁራጭ ውስጥ ያስገባሉ። ይህ እርምጃ ገደብ ኢንዛይሞችን እና የዲ ኤን ኤ ሊጋዝ ይጠቀማል እና ሀ ይባላል ligation . ከኤ ligation የሚቀጥለው እርምጃ ዲ ኤን ኤውን ወደ ባክቴሪያ ማዛወር በሚባለው ሂደት ውስጥ ነው ለውጥ.

በመቀጠል፣ አንድ ሰው ለሊጌሽን ምን ያህል ዲ ኤን ኤ ያስፈልጋል?

ለውጤታማነት አጠቃላይ የቬክተር + አስገባ ከ1-10 Μg/ml መካከል መሆን አለበት። ligation . ቬክተር፡የሞላር ሬሾን በ1፡1 እና 1፡10 መካከል አስገባ (1፡3 የተለመደ ነው)። ስለእርስዎ እርግጠኛ ካልሆኑ ዲ.ኤን.ኤ ማጎሪያዎች ፣ ከተለዋዋጭ ሬሾዎች ጋር ብዙ ማያያዣዎችን ያከናውኑ።

የ ligation ምላሽ ለምን ያህል ጊዜ ማከማቸት ይችላሉ?

ሊግሽን ይችላል። በክፍል ሙቀት ወይም ማቀዝቀዣ (ከ12-16 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ያስቡ) በአንድ ሌሊት ወይም ለጥቂት ቀናት እንኳን መደረግ አለበት. አንተ በእውነት ስራ በዝቶብሃል ትችላለህ እንዲሁም ligation አከማች በማቀዝቀዣው ውስጥ እና በኋላ ላይ አውጣው በክፍል ሙቀት ውስጥ ለእንደ ረጅም እንደ አስፈላጊነቱ.